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從兔單抗到重組兔單抗
更新時間:2023-10-13 瀏覽次數(shù):4935
自 1998 年起,Abcam 始終致力于為的科學(xué)家提供各種生物試劑和試劑盒。為了滿足不斷變化的科研需求,Abcam投入大量人力物力開發(fā)新技術(shù)。
十多年前,醫(yī)學(xué)家朱偉民一手打造出了 Abcam 的 RabMAb® 抗體平臺。該平臺出品的抗體現(xiàn)已廣泛用于的研究、診斷和治療領(lǐng)域。
*,RabMAb 一抗的制備有別于常規(guī)的利用小鼠或大鼠的生產(chǎn)方法,而是利用了*的技術(shù)“兔單克隆抗體生產(chǎn)方法”。
其基本原理與制備小鼠單克隆抗體相似。
兔融合伴侶細(xì)胞能與兔 B 細(xì)胞融合,形成兔雜交瘤細(xì)胞——真正的兔-兔雜交瘤細(xì)胞 。隨后篩選雜交瘤細(xì)胞以選擇具有特異和敏感的抗原識別能力的克隆體,并采用多種方法鑒定抗體(參見下圖的 RabMAb 生產(chǎn)工藝)。
兔與其他物種,如小鼠、大鼠、雞相比,擁有*的免疫系統(tǒng)。它有很大的B細(xì)胞反應(yīng)庫(repertoire),這意味著它們可產(chǎn)生多樣的抗體。
兔免疫系統(tǒng)的親和力優(yōu)化機(jī)制也比小鼠和其他嚙齒動物更有效??衫猛卯a(chǎn)生這些高親和力的抗體,甚至是針對在小鼠中不具有免疫原性的抗原也能產(chǎn)生抗體。平均而言,兔單克隆抗體對靶抗原的親和力是小鼠單克隆抗體的 10-100 倍。由于具有更大且更多樣的 B 細(xì)胞反應(yīng)庫,兔抗體在區(qū)分諸如表位變異(如修飾)、突變和構(gòu)象變化等細(xì)微差別方面也更具優(yōu)勢。
然而無論基于動物來源,還是基于雜交瘤的抗體制備過程,都可能會面臨批次差異這樣的問題:有的時候小鼠抗體初表現(xiàn)良好,但在后續(xù)批次中卻無法產(chǎn)生相同的結(jié)果。
這可能是由于雜交瘤細(xì)胞系漂移、基因丟失或突變。盡管多克隆抗體在生命科學(xué)研究中始終發(fā)揮著重要作用,但批間差異會更加頻繁地出現(xiàn)。
為了向用戶提供具有優(yōu)異靈敏度和*一致性的抗體,abcam設(shè)計了 RabMAb 兔單抗的重組版本。這種組合可提供多種*優(yōu)勢。
重組抗體是通過將免疫特異性重鏈和輕鏈抗體克隆到高產(chǎn)的哺乳動物表達(dá)載體中而制成的。將得到的載體引入到表達(dá)宿主(如細(xì)菌、酵母或哺乳動物)中,用于生產(chǎn)高質(zhì)量的功能性抗體??稍隗w外通過克隆 ScFV 或 Fab 形成 Ig 框架來構(gòu)建重組抗體,也可從現(xiàn)有的雜交瘤細(xì)胞中產(chǎn)生重組抗體。在基于雜交瘤的重組抗體制備中,常用的是小鼠、大鼠和兔模型。然而,只要有適當(dāng)?shù)墓押塑账嵋锟捎?,可從任何物種中開發(fā)重組抗體。
重組抗體的優(yōu)勢
與傳統(tǒng)的單克隆抗體和多克隆抗體相比,重組抗體具有若干優(yōu)點:
1、更高的一致性和重復(fù)性
因為重組抗體是由一組*的基因發(fā)展而來的,所以抗體生產(chǎn)是可控且可靠的??梢员苊怆s交瘤細(xì)胞制備中的一些問題,如基因丟失、基因突變和細(xì)胞株漂移等。這使得抗體的批次間差異非常小,從而為您提供高度可重復(fù)的結(jié)果。
2、更高的靈敏度和特異性
利用重組技術(shù),更容易通過抗體工程提高抗體特異性和靈敏度。所需克隆的選擇過程發(fā)生在雜交瘤細(xì)胞和重組克隆階段,這使我們能夠選擇合適的抗體質(zhì)量。
3、易于擴(kuò)展
隨著抗體基因的分離,與傳統(tǒng)單克隆技術(shù)相比,抗體表達(dá)能夠以任何規(guī)模在更短的時間內(nèi)進(jìn)行。這意味著我們可以在數(shù)周而非數(shù)月內(nèi)產(chǎn)生定制抗體。
4、無動物高通量生產(chǎn)
一旦分離出產(chǎn)生抗體的基因,就可以實現(xiàn)無動物體外生產(chǎn)。
當(dāng)前,abcam擁有超過 10,000 種重組 RabMAb 抗體,其中很多都是經(jīng)過KO敲除驗證的,同時保證了檢測結(jié)果的一致性和重復(fù)性。
而且重組 RabMAb 抗體還在關(guān)鍵應(yīng)用(WB、IHC、ICC/IF、IP 和流式細(xì)胞術(shù))和物種(人、小鼠和大鼠)中進(jìn)行了驗證,可以滿足絕大多數(shù)科研工作者的需求。
在此建議所有抗體使用者在購買抗體時關(guān)注重組及特異性數(shù)據(jù)。